潔凈室生物學(xué)評(píng)價(jià)方法-回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口微生物透過(guò)率

回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口微生物透過(guò)率

1.1儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合以下要求 ：

1儀器設(shè)備 ：

Φ90玻璃平皿 （或塑料平皿） ；

空氣微生物采樣器 （ 固體撞擊式采樣器、離心式采樣器 、液 體沖擊式采樣器等均可使用，常用的為安德遜（ Andersen） 采 樣器 ，隸屬于固體撞擊式采樣器） ；

微生物氣溶膠發(fā)生器 （ 由氣泵、油水分離器 、流量計(jì)、高效 過(guò)濾器、噴霧器、緩沖瓶等組成） ；

各種玻璃移液管、吸管、試管、容器瓶等 ；

計(jì)時(shí)器 （如秒表） ；

恒溫培養(yǎng)箱 ； 潔凈工作臺(tái)； 高壓蒸汽消毒鍋 。

2材料：

膜蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基 ；

生理鹽水；

75 %酒精；

菌種 （宜選用毒性小或沒(méi)有毒性 ，且便于區(qū)別大氣雜菌的特 定菌種，常用的有枯草芽孢桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、大腸噬菌體 等） ；

采樣介質(zhì)可選用硅酮類 、石油胨類、醇類 、糖類 、纖維素類 、蛋白類 、混合類 、組織培養(yǎng)液等 ；

套筒 （測(cè)定回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng) 口時(shí)需要使用，罩住整個(gè)入口，使檢漏范圍包括邊框 ，長(zhǎng)度應(yīng)使通過(guò)氣流時(shí)間為 0. 5s~1s，見(jiàn)圖F1. 1） 。

1.2透過(guò)率應(yīng)按以下方法評(píng)價(jià)：

在回、排風(fēng)高效過(guò)濾 風(fēng)口進(jìn)風(fēng)端加設(shè)套筒，在 套筒 口部發(fā)生微生物氣溶膠，在過(guò)濾器出風(fēng)面用浮 游菌法采樣 ，由回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計(jì)算得出微生物透過(guò)率。

1.3 檢測(cè)步驟應(yīng)符合下列要求：

1 制定方案 ：明確評(píng)價(jià)任務(wù) ，制定詳細(xì)的評(píng)價(jià)方案 ，包括 確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度 、潔凈壓縮空氣流 量 ，確定在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期、采 樣次數(shù)等 ，一般可根據(jù)回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過(guò)濾 效率進(jìn)行計(jì)算。

2 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ：根據(jù)預(yù)先制定的評(píng)價(jià)方案 ，準(zhǔn)備所需材料、儀器設(shè)備 ，制作采樣培養(yǎng)血，一般而言，采樣細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培 養(yǎng)基 ，采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基，采樣病毒用根據(jù)病毒 特性配制的采樣介質(zhì)。

3 發(fā)生微生物氣溶膠 ：將培育好的高濃度微生物溶液，一般為（10⁸~10¹⁰) cfu/mL，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度（步驟 1確定的濃度） ，然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液 瓶 ，由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的進(jìn)風(fēng)端將 微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。

4 采樣 ：對(duì)于回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口 ，可在其后的出風(fēng)管 道中采樣 ，離排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口的距離根據(jù)實(shí)際工程而定，原則 上出風(fēng)后有所混合 ，能近則好 ，采樣點(diǎn)沿風(fēng)管寬度方向均勻布置 3 點(diǎn)。采樣周期、采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評(píng)價(jià)方案執(zhí)行。采樣過(guò)程中，不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生 ，采樣結(jié)束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠 ，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液，且需對(duì)剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗(yàn)證，以修正菌液濃度 。

5 培養(yǎng) ：將采好的平皿立即蓋上蓋 ，細(xì)菌類在 （ 35~37） ℃ 培養(yǎng)1~2) d ，結(jié)核菌培養(yǎng) 3 周，真菌在 28℃培養(yǎng).3d 。上述培 養(yǎng)時(shí)間可根據(jù)所采樣微生物特性而適當(dāng)調(diào)整 ，培養(yǎng)的過(guò)程 中應(yīng)定 期觀察培養(yǎng)箱內(nèi)菌落的生長(zhǎng)情況 ，避免培養(yǎng)箱內(nèi)干燥菌落不生長(zhǎng) 或培養(yǎng)皿內(nèi)菌落過(guò)多充分生長(zhǎng)匯合等情況的發(fā)生。

6 計(jì)數(shù)：可以目測(cè) 、電子顯微鏡、菌落計(jì)數(shù)器等對(duì)采集到 且培養(yǎng)好的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù) ，當(dāng)采到的菌落很多時(shí)，在它們未生長(zhǎng) 匯合前，用顯微鏡及早觀察 ，將平皿劃成許多相等的部分抽出一 部分?jǐn)?shù)菌，然后乘以所劃份數(shù)，即可得出每皿總菌數(shù)。計(jì)數(shù)完畢 后 ，可根據(jù)式 （F.1.3-1）計(jì)算濃度 ：

（F.1.3-1）

式中：C 一一微生物氣溶膠濃度 （cfu/ L) ；

N 一一采樣到的微生物所形成的菌落數(shù)（cfu) ；

V 一一微生物采樣器的采樣流量 （ l.1/min) ；

ts 一一一采樣周期 （min） 。

7微生物透過(guò)率計(jì)算 ：根據(jù)回、排風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度由式 （F1. 3-2） 可計(jì)算得出微生物透過(guò)率 K：

(F. 1. 3-2)

式中：Cd 一一回、排 風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng) 門后的微 生物氣溶膠濃度(cfu/L），可由式（F. 1. 3-1）計(jì)算得出；

Cu 一一回、排 風(fēng)高效過(guò)濾風(fēng) 口前的 微生物氣溶膠濃度(cfu/L），可根據(jù)微生物溶液濃度C1 ( cfu/ mL） 、 菌液消耗容積 V (mL） 、氣溶膠發(fā)生時(shí)間 t ( min） 、 風(fēng)口風(fēng)量 G（L/min） 由式 （ F. 1. 3-3） 計(jì)算得出：

（F. 1. 3- 3)

8消毒滅菌 ：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后 ，需對(duì)剩余菌液 以及所用各種儀器 、 設(shè)備、平皿等進(jìn)行消毒滅菌、酒精擦洗處理。

1.4在進(jìn)行潔凈室生物學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)符合以下要求 ：

1正式試驗(yàn)前，應(yīng)進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn) ，并對(duì)各種儀器進(jìn)行調(diào)試 和標(biāo)定。

2應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn) 。

3應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)。

4應(yīng)在陽(yáng)性試驗(yàn)中長(zhǎng)菌，陰性試驗(yàn)組不長(zhǎng)菌。

5實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng) 做好各種儀器、設(shè)備、衣物等的消毒滅菌處理。

6試驗(yàn)結(jié)束后，需對(duì)微生物氣溶膠發(fā)生器內(nèi)的剩余菌液活性進(jìn)行涂布法驗(yàn)證，修正式（F. 1. 3-3） 中的菌液濃度。

7采樣周期應(yīng)設(shè)計(jì)合理 ，當(dāng)確定采樣周期存在一定困難時(shí)， 宜增加采樣次數(shù)，每次采樣使用不同的采樣周期。

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